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杭州亞萊博儀器有限公司
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色譜柱的清洗和再生方法
點擊次數(shù)：3814 更新時間：2013-03-06
除非特殊說明，在所有情況下，所用溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40-60倍。
應(yīng)在清洗過程開始和結(jié)束時各測一次柱效和容量因子等，比較色譜柱性能的改善，以確定清洗的效果。
確保色譜柱中沒有樣品和緩沖溶液，清洗前所用的溶劑應(yīng)與zui初清洗時所用的溶劑相溶。
應(yīng)確保實驗測試時所用的流動相與色譜柱中zui后的溶劑相溶。
1正相填料
用四氫呋喃沖洗。
用甲醇沖洗。
用四氫呋喃沖洗。
二氯甲烷沖洗。
用無苯正己烷沖洗。
2反相填料
用HPLC級水沖洗，沖洗時進(jìn)4等份的200μl的二甲亞砜（DMSO）。
用甲醇沖洗。
用氯仿沖洗。
用甲醇沖洗。
3陰離子交換填料
用HPLC級水沖洗。
用甲醇沖洗。
用氯仿沖洗。
4 陽離子交換填料
用 HPLC 級水沖洗；在沖洗的過程中進(jìn)4 等份200μl 的DMSO
四氫呋喃沖洗。
5 蛋白質(zhì)凝膠過濾填料
去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染物有兩種清洗/再生的方法。
弱保留蛋白質(zhì)
用30moL/L pH3.0 磷酸鹽緩沖液沖洗。
強(qiáng)保留蛋白質(zhì)
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四種再生的方法，選用哪一種方法依賴于被分析物和所用的溶劑。
酸堿再生
適合于使用極性流動相分析離子類分析物。
將色譜柱倒裝
用50ml含0.1%三F乙酸的四氫呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速沖冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速沖冼。
用50ml含0.1%三F乙酸的四氫呋喃／水（1:1）溶液1ml/min流速沖冼。
用95%甲醇水溶液沖洗重新平衡。
將色譜柱改為正向。
作者：英國的R.Plumb-Glaxo
強(qiáng)有機(jī)溶劑再生
適合于水相分析極性或離子類分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速沖洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速沖洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速沖洗。
用水沖冼至平衡。
正相再生
適合于主要使用正相流動相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速沖洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速沖洗。
用50ml水以1ml/min流速沖洗。
用50ml 0.1mol/L鹽酸以1ml/min流速沖洗。
用50ml水以流速1ml/min沖洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速沖洗。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速沖洗。
用流動相沖冼至平衡。
作者：瑞典的A.Karlsson-Uppsala
三F乙酸的去除
適合于流動相中含有三F乙酸的多孔石墨化碳柱。
用加熱到75℃的乙腈沖洗，同時色譜柱也要保持在這一溫度。
7 帶金屬抗衡離子的聚合物填料
基質(zhì)是帶金屬抗衡離子的聚合物色譜柱，有三種再生方法，每種方法詳細(xì)列于下表：
| 色譜柱類型 | 金屬污染物 | 有機(jī)污染物 | 色譜柱清冼 |
| 氫離子型 | 用25℃的0.1mol/L的H2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 | 用65℃的20:80的ACN:0.01NH2SO4溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 |
| 鈣離子型 | 用25℃的0.1mol/L pH6.3的Ca（NO3）2溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 |
| 鈉離子型 | 用85℃的0.1mol/L 的NaNO3溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反相沖冼4小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 |
| 銀離子型 | 沒有再生過程的報導(dǎo)。 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 |
| 鉛離子型 | 用85℃的pH 5.3的0.1M Pb（NO3）2溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4—16小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4小時 | 用25℃的20:80的乙腈水溶液以0.1ml/min的流速反向沖冼4 |